Реакции иммунитета



Сторінка13/18
Дата конвертації01.02.2021
Розмір208 Kb.
1   ...   10   11   12   13   14   15   16   17   18
Стадии метода ПЦР:

І. Выделение ДНК возбудителя из биологического материала.

ІІ. Амплификация ДНК (многократное копирование специфического фрагмента ДНК) – проводится в термоциклерах «Терцик – Украина» - специальный прибор с определенным температурным режимом для проведения циклов ПЦР, каждый из которых состоит из 3-х этапов:

1. Денатурация – нагревание реакционной смеси до 93-950С, в результате чего двухцепочечные молекулы ДНК расплетаются с образованием двух одноцепочечных молекул.

2. Отжиг (присоединение) – при наличии искомой ДНК-мишени праймеры отжигаются (присоединяются) к ДНК-мишени при температуре 600С. Отжиг происходит в соответствии с правилом комплементарности Чаргаффа (напротив аденина всегда находится тимин, а напротив гуанина – цитозин). Когда отжиг праймеров произошел, Таq-полимераза начинает достраивание второй цепи ДНК.

3. Синтез (элонгация) – доводят температуру в реакционной смеси до оптимума работы фермента (720С). Синтез второй цепи продолжается с максимальной эффективностью. В дальнейшем этап денатурации, отжига и элонгации многократно повторяются до 30 и более раз. На каждом температурном цикле количество синтезированных копий фрагмента ДНК удваивается. Таким образом, данный метод основан на способности ДНК-полимеразы достраивать одноцепочечную ДНК с образованием двухцепочечной молекулы.



Праймеры – короткие искусственно синтезируемые молекулы ДНК, идентичные соответствующим участкам ДНК-мишени.

Taq-полимераза – фермент, обеспечивающий достраивание второй цепи ДНК

ІІІ. Детекция продуктов амплификации. Продукты ПЦР (ампликоны) идентифицируют при помощи гелевого электрофореза и результат реакции учитывают по свечению искомой ДНК возбудителя в УФ свете с помощью прибора - трансиллюминатора.




Поділіться з Вашими друзьями:
1   ...   10   11   12   13   14   15   16   17   18


База даних захищена авторським правом ©res.in.ua 2019
звернутися до адміністрації

    Головна сторінка