Реакции иммунитета


Полимеразная цепная реакция (ПЦР)



Сторінка12/18
Дата конвертації01.02.2021
Розмір208 Kb.
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   18
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - это амплификация специфических последовательностей нуклеиновых кислот, с помощью которой в течение нескольких часов можно размножить нужную последовательность в миллионы раз. ПЦР позволяет осуществить такую амплификацию в пробирке при помощи фермента термостабильной ДНК-полимеразы из 4 дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, являющихся структурными элементами любой ДНК, и коротких олигонуклеотидных 20-30-членных затравок (праймеров), комплементарных 3´-концевым последовательностям антипараллельных цепей ДНК гена.

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации - изолированное умножение гена или его фрагмента) специфической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок – так называемых праймеров. Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле. Метод высокоспецифичен и очень чувствителен. Он позволяет обнаружить несколько копий ДНК в исследуемом материале. Данный метод основан на выявлении в исследуемом образце специфического фрагмента ДНК возбудителя и на принципе естественной репликации ДНК, включающем расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплементарное достраивание обеих нитей.

Достоинство:

1. Высокая чувствительность, позволяющая выявить даже единичные клетки возбудителя, независимо от их природы за 1-2 часа.

2. Высокая специфичность – выявляется характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК.

3. Быстрота получения результата – весь процесс занимает 3-4 часа.

4. Использование при определении возбудителя непосредственно клинического материала, без специального выделения чистой культуры возбудителя и его подращивания.

5. Диагностика не только свежих, но и хронических форм инфекций. Метод эффективен при диагностике трудно культивируемых и персистирующих форм патогенных микроорганизмов.

6. Возможность выделения ДНК не только живых, но и убитых микроорганизмов.



Поділіться з Вашими друзьями:
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   18


База даних захищена авторським правом ©res.in.ua 2019
звернутися до адміністрації

    Головна сторінка