Реакции иммунитета



Сторінка10/18
Дата конвертації01.02.2021
Розмір208 Kb.
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   18
Радиоиммунный метод, является наиболее информативным, основан на исследовании характера взаимодействия антитела с антигеном с образованием иммунного комплекса, в один из компонентов которого (антиген или антитело) введена радиоактивная метка. Наибольшее распространение получил метод конкуренции за специфические антитела меченного радиоактивным изотопом антигена и такого же антигена, но свободного от радиоактивной метки, количество которого необходимо определить в исследуемой биологической среде. С этой целью в исследуемую жидкость, в которой предполагается наличие антигена, добавляют известное количество такого же меченного антигена и стандартное количество антисыворотки с соответствующими антителами.

Если в исследуемой жидкости отсутствует искомый специфический антиген, то около 70–80% меченного антигена связывается с антителами, обусловливая высокую радиоактивность образующегося преципитата. Если же в биологической среде присутствует искомый антиген, он конкурирует с меченным антигеном и связывает часть антител. В результате радиоактивность преципитата падает по сравнению с контролем. На этом принципе основано количественное определение антигенов или антител. Так как меченый антиген добавляется в определённой дозе, то можно определить, какая его часть связалась с антителами, а какая осталась не связанной в результате конкуренции с выявляемым не меченым антигеном. При определённых концентрациях количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству определяемого антигена. После взаимодействия антигенов с антителами образовавшийся комплексы антиген – антитело отделяют от свободного меченого антигена. Способы отделения: 1.Электрофорез; 2. Гель – фильтрации; 3.Фракционного осаждения иммунного комплекса этанолом и др. Отделив меченый антиген от комплекса антиген – антитело определяют количество меченого антигена, связавшегося в комплексе по количеству импульсов (сцинтилляционным счетчиком). Уменьшение количества импульсов в единицу времени в сравнении с соответствующими контролями свидетельствует о присутствии гомологичного меченого антигена, связанного с антисывороткой, в результате чего антиген не вступил в реакцию и не определяется в комплексе антиген – антитело.

В середине 60-х годов для идентификации и локализации антигенов в гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузных и иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было предложено использовать молекулы ферментов. Являясь по своей природе мощными химическими катализаторами, ферменты способны эффективно осуществлять наработку легко детектируемого продукта, что делает возможным определение ферментной метки в весьма малых концентрациях.

На протяжении последних трех десятилетий иммуноферментные методы анализа интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное прикладное значение. Наибольшее распространение получили гетерогенные методы иммуноферментного анализа, основанные на использовании полистироловых планшетов для иммобилизации антител или антигенов, специфическом связывании определяемого вещества на стенках лунок планшета и последующем выявлении образовавшихся иммунокомплексов с помощью меченных ферментами компонентов.





Поділіться з Вашими друзьями:
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   ...   18


База даних захищена авторським правом ©res.in.ua 2019
звернутися до адміністрації

    Головна сторінка